Skip to content

wszy lonowe objawy

4 miesiące ago

611 words

Pnkd ulega ekspresji zarówno w prążkowiu neuronów średnich spiny, jak iw interneuronach (ryc. 1C), a także w istocie czarnej (semi-pars compacta) (SNC), która składa się z neuronów dopaminergicznych wystających na prążkowie, oraz istocie czarnej półkuli (SNR), która jest wyjściową struktura zwojów podstawy (dodatkowa Figura 2A). W móżdżku Pnkd ulega ekspresji w komórce ziarnistej i warstwach cząsteczkowych oraz w komórkach Purkinjego (dodatkowa postać 2B). Podwójne barwienie immunochemiczne przeprowadzono z użyciem tych surowic odpornościowych i markerów specyficznych dla neuronów lub glej, a wyniki wykazały, że Pnkd jest wyrażany w neuronach, ale nie w oligodendrocytach lub astrocytach (Figura 1, D. F). Nie zaobserwowano różnicy w rozkładzie białka u myszy z mutacją Pnkd w porównaniu z kontrolnymi z miotu lub transgenicznymi myszami Pnkd WT (dane nie przedstawione). W PNKD-L przewidziano jedną słabą prognozę segmentu transmembranowego (7). Aby ustalić, czy PNKD-L jest białkiem transbłonowym, przeprowadziliśmy badania z permeabilizowanymi i niepermeabilizowanymi komórkami HEK293 transfekowanymi PNKD-LPHEMP. PNKD-L może być wykryty zarówno na N- i C-końcowych przeciwciałach w błonie w permeabilizowanych komórkach, ale nie w niepolarnych komórkach (Figura 2A). Przygotowaliśmy również subkomórkowe frakcje błony komórek HEK293 transfekowanych PNKD-L A EGFP, przeprowadziliśmy podział detergentu z Triton X-114 (TX-114) na frakcję błony komórkowej i wykazaliśmy, że po obróbce TX-114 PNKD-L A EGFP może być wykrywany w warstwie hydrofilowej, ale nie w warstwie hydrofobowej, przy użyciu przeciwciał PNKD (Figura 2B). Zatem wydaje się, że PNKD-L jest związany z błoną, chociaż nie jest białkiem transbłonowym integralnym z błoną. Figura 2PNKD-L jest białkiem związanym z błoną. (A) Badania immunobarwienia permeabilizowanych i niepermeabilizowanych komórek HEK293 wskazują, że PNKD-L jest białkiem związanym z błoną. Komórki HEK293 transfekuje się PNKD-EGFP, a następnie barwi immunohistochemicznie, stosując N- i C-końcowe przeciwciała PNKD i sprzężone z Cy3 kozie przeciwciało przeciw-królicze IgG wtórne. Zarówno przeciwciała N-i C-końcowe PNKD wykrywają transfekowane PNKD-L. EGFP w permeabilizowanych komórkach HEK, ale nie wykrywają ich w nieprofilowanych komórkach HEK. Skalowane pręty: 10 mikronów. (B) Podział fazy detergentowej frakcji błony HEK293 transfekowanej PNKD-L-EGFP. PNKD-L-EGFP (~ 75 kDa) można wykryć w surowej frakcji błony przez oba przeciwciała PNKD, ale po obróbce TX-114, PNKD-L A EGFP można wykryć w warstwie hydrofilowej, ale nie w warstwie hydrofobowej. . Mysi model niosący mutacje PNKD rekapituluje fenotyp PNKD. Trzy linie transgenicznych myszy BN z mutacją Pnkd (myszy mut-Tg, Pnkd) wytworzono przez wprowadzenie mutacji kodujących A7V i A9V do Pnkd (Figura 3A). Powstały konstrukt BAC zawierał mysi promotor i duży region flankujący (rozciągający się w górę 62 kb) i miał zawierać wszystkie elementy regulatorowe działające w układzie cis, potrzebne do podsumowania wzorca ekspresji endogennych loci. Ponadto wygenerowaliśmy myszy transgeniczne Pnkd WT BAC (WT-Tg). Liczba kopii wszystkich linii została oceniona metodą Southern blot; linie mut-Tg zawierały 1. 2 kopie, a linie WT-Tg zawierały 2. 3 kopie (Figura 3B). Analiza Western blot wyciągów z mut-Tg i WT-Tg wykazała, że poziomy białka były zgodne z liczbą kopii transgenu (Figura 3C). Wygenerowaliśmy również 2 linie myszy Pnkd-KO (rysunek 3D). Zarówno RT-PCR, jak i Western blot potwierdziły, że są one prawdziwymi zerowymi wartościami Pnkd (Figura 3, E i F). Figura 3Generacja myszy Pnkd-transgenicznych i -KO. (A) 2 ludzkie mutacje (A7V i A9V) wprowadzono do BAC zawierającego Pnkd. 62 kb sekwencji flankującej 5. miejsca startowego ATG jest obecne w BAC i ma zawierać wszystkie elementy regulatorowe działające w układzie cis prowadzące do ekspresji we wzorze zgodnym z endogennymi allelami
[więcej w: ph metria, psychoterapia psychodynamiczna, porażenie piorunem ]

0 thoughts on “wszy lonowe objawy”