Skip to content

szpital tomaszów lubelski kontakt

3 miesiące ago

554 words

Supernatant następnie rozmrożono i wirowano przez 20 minut, a supernatanty analizowano pod kątem biogennych monoamin i / lub aminokwasów, stosując specyficzny test HPLC z detektorem elektrochemicznym Antec Decade II (utlenianie: 0,5) pracującym w 33 ° C. Następnie 20. Ll supernatantu wstrzyknięto za pomocą autosamplera Water 717+ na kolumnę Phenomenex Nucleosil (5. L, 100A) C18 HPLC (150 x 4,60 mm). Aminy biogenne eluowano fazą ruchomą składającą się z 89,5% 0,1 M TCA, 10. 2 M octanu sodu, 10. 4 M EDTA i 10,5% metanolu (pH 3,8). Rozpuszczalnik dostarczono przy 0,6 ml / min, stosując pompę Waters 515 HPLC. Kontrola HPLC i akwizycja danych były zarządzane przez oprogramowanie Millennium 32. Do analizy wyników użyto dwuczynnikowej ANOVA. Mikrodializa in vivo. Mikrodializa została przeprowadzona w czujnych, swobodnie poruszających się myszach. Po znieczuleniu tribromoetanolem i umieszczeniu w ramce stereotaktycznej (Stoelting) sondę do mikrodializy wszczepiono do prążkowia (+0,6 AP, +1,7 ML, 4,5 DV), jak opisano wcześniej (49). Po operacji sondę perfundowano w sposób ciągły sztucznym płynem mózgowo-rdzeniowym (ACSF: 147 mM NaCl, 3,5 mM KCl, 1,2 mM CaCl2, 1,2 mM MgCl2, mM NaH2PO4 i 25 mM NaHCO3, pH 7,0-7,4) z szybkością przepływu 0,6 l / minutę. W przypadku konwencjonalnej mikrodializowania pobrano próbki 12-15 godzin po zabiegu w 20-minutowych odstępach, a 6 kolejnych próbek zebrano jako linię podstawową. Aby określić wpływ stresu na przepełnienie dopaminy, myszom wstrzyknięto sól fizjologiczną (10 ml / kg, ip) i przeniesiono do nowej klatki. Sześć próbek pobrano po wstrzyknięciu w 20-minutowych odstępach. Następnie, 2 godziny po naprężeniu, myszom wstrzyknięto 25 mg / kg kofeiny (10 ml / kg, sc) i 6 próbek zebrano w 20-minutowych odstępach. W przypadku braku mikroskopii strumienia netto, po implantacji, sondę perfundowano ACSF plus 250. M kwasu askorbinowego z szybkością przepływu 0,6. L / min przez noc. W dniu eksperymentu sonda była perfundowana w tym samym tempie z perfuzatem plus różne stężenia dopaminy (0, 2, 10 lub 20 nM; Cin) w pseudolosowej kolejności. Po 25-minutowym okresie równoważenia zebrano 3 próbki (Cout). Następnie zmieniono stężenie dopaminy w perfuzacie i proces powtarzano aż do zbadania wszystkich stężeń dopaminy. Lokalizacja sondy w prążkowiu została potwierdzona histologicznie. Próbki analizowano za pomocą HPLC (kolumna MD-150, długość 150 mm, 3 mm ID; ESA) z komórką do mikrodializy 5014B. Faza ruchoma składała się z 1,7 mM soli sodowej kwasu -oktanosulfonowego, 25 .M EDTA, 75 mM NaH2PO4 i 8% acetonitrylu (pH 2,9) przy szybkości przepływu 0,6 ml / min. Neuroprzekaźniki i metabolity zidentyfikowano przez dopasowanie czasu retencji do czasu znanego standardu. W przypadku braku mikroskopii strumienia netto, dane poddano analizie regresji liniowej Cin. Cout versus Cin. Punkt przecięcia x zapewnia bezstronne oszacowanie pozakomórkowego stężenia dopaminy. Dane analizowano przy użyciu 2-czynnikowej ANOVA lub testu Student s St, jeśli było to właściwe. Badania amperometryczne myszy Pnkd. Zapis nagrań mózgu wykonano przy użyciu standardowych protokołów wyszczególnionych w Metodach uzupełniających. Opisano zapisy amperometryczne segmentu mózgowego (50, 51). Zastosowano miejscowe kąpiele blokera wychwytu zwrotnego dopaminy, nomifenzyny (3. M) przez co najmniej 30 minut, aby uzyskać dostęp do udziału wychwytu zwrotnego w wywołanym sygnale dopaminy. Pięć impulsów sygnałowych / wycinek uśredniono do średniej średniej, a dwie grupy (myszy Pnkd w porównaniu do myszy z miotu WT) porównano z jednoczynnikową ANOVA dla średniej. Badania farmakologiczne. Aby ocenić reakcję myszy na kofeinę i etanol, zmodyfikowano technikę potrójnej stymulacji z Richtera i Loschera (52)
[patrz też: osa a pszczoła, picie oleju lnianego, psychoterapia psychodynamiczna ]

0 thoughts on “szpital tomaszów lubelski kontakt”