Skip to content

szpital nr 2 cieszyn

2 miesiące ago

316 words

Co ważne, badania immunoprecypitacji krzyżowej w osoczu z przeciwciałami przeciw MPO lub PON1 były również zgodne z tworzeniem trójskładnikowych kompleksów obejmujących HDL (APOA1), MPO i PON1, ponieważ immunoprecypitacja przeciwciałami przeciw MPO lub PON1 podobnie rozrywała pozostałe 2 składniki (suplement Rysunek 1). Aby w pełni ocenić siłę oddziaływań między każdym składnikiem przypuszczalnego kompleksu HDL-MPO-PON1, wykonano spektroskopię rezonansu plazmonowego w celu oceny oddziaływań wiązania między każdym ze składników. Co godne uwagi, HDL, MPO i PON1 są ze sobą powiązane z wysokim powinowactwem, wykazując wartości KD w zakresie niskich nanomoli do pik-miola, w zależności od badanej interakcji (Suplementalna Figura 2). PON1 w osoczu występuje w podzbiorze cząstek HDL (oszacowanym na około z 8 × 10 cząstek HDL) (36). MPO jest znacznie mniej obfite niż PON1 lub HDL w osoczu. Analiza Western blot z przeciwciałami MPO po immunoprecypitacji z PON1 lub APOA1 ujawniła, że ogromna większość MPO w osoczu jest związana z HDL i PON1, ponieważ nominalne wykrywalne MPO pozostaje w supernatancie po immunoprecypitacji z przeciwciałami przeciwko APOA1 i PON1 (nie pokazano). Powyższe wiążące badania sugerują, że MPO, gdy występuje w osoczu lub surowicy lub w innych tkankach lub płynach, może oddziaływać z APOA1 i PON1 w podzbiorze cząstek HDL. Zdolność MPO do utleniania APOA1 i zmiany funkcji HDL jest dobrze znana (6, 23). Nie jest jednak jasne, czy interakcje pomiędzy MPO i PON1 mogą zmienić funkcję każdego z białek związanych z HDL. Następnie zbadaliśmy, czy aktywność MPO (przy różnych poziomach H2O2) wpływa na aktywność PON1 w złożonej surowicy podobnej do matrycy. Fizjologiczne poziomy HDL (1 mg białka / ml) i PON1 (100 .g / ml) dodano do surowicy z niedoborem lipoproteiny od zdrowego ochotnika, w którym mierzone poziomy MPO były nominalne (<50 pikomoli). W przypadku braku dodatkowego MPO, wzrastające ilości substratu MPO H2O2 miały minimalny wpływ na aktywność PON1. Przeciwnie, po dodaniu patofizjologicznych poziomów MPO (np. 5 nM), obserwowano zależne od dawki hamowanie katalitycznej aktywności PON1 przy wzrastających poziomach H2O2 (Figura 1A). Dodatek dużego molowego nadmiaru metioniny, zmiatacza kwasu podchlorawego (HOCl). główny utleniacz powstały z MPO w obecności poziomów chlorków w osoczu. blokowały hamujący wpływ MPO / H2O2 na PON1, w porozumieniu z HOCl jako reaktywnym utleniaczem odpowiedzialnym za utratę aktywności katalitycznej PON1. Zgodnie z tym, w równoległym badaniu, HOCl dodawano stopniowo do surowicy z niedoborem lipoproteiny uzupełnionej HDL i PON1 w nieobecności MPO. Ponownie zaobserwowano zależne od dawki hamowanie aktywności katalitycznej PON1 (Figura 1A). Co ważne, porównania między MPO / H2O2 / Cl. system (enzymatyczne źródło HOCl) i HOCl w dawkach równoważnych molarnie wykazywały, że MPO jest silniejszym inhibitorem aktywności PON1 na każdym zbadanym poziomie utleniacza, zgodnie z wiązaniem MPO z kompleksem HDL-PON1 w surowicy i reaktywnym HOCl tworzonym przez MPO o krótszej odległości dyfuzji (i tym samym mniejszej wymianie) przed uderzeniem w cel PON1 (Figura 1A). Figura 1MPO i PON1 hamują aktywność każdego z osobna in vitro. (A) PON1 (100 .g / ml) inkubowano z HOCl lub H2O2 i MPO (50 nM) w 50 mM buforze Na [PO4] (pH 7,0) uzupełnionym izolowanym ludzkim HDL (1 mg / ml) i 100 mM NaCl w 37 ° C przez 60 minut. Następnie przeprowadzono oznaczenie ilościowe aktywności paraoksonaz w stosunku do braku ekspozycji na utleniacz. Pokazano również wpływ różnych poziomów samego H2O2 (tj. Bez dodatku MPO) lub z dodatkiem zmiatacza HOCl metioniny (Met) (10-krotny nadmiar molowy względem utleniacza) do układu MPO / H2O2 [więcej w: przetoka okołoodbytnicza, pszeniczny brzuch, osa a pszczoła ]

0 thoughts on “szpital nr 2 cieszyn”