Skip to content

Przeciwciała przeciwko proteazie rozszczepiającej czynnik von Willebranda w ostrym zakrzepowym trombocytopenicznym Purpura ad 7

1 miesiąc ago

519 words

IgG wyizolowano w sposób ilościowy: ml osocza naniesiono na ml kulek agarozowych z białkiem A, a przeciwciało IgG eluowano 4 ml buforu glicynowego i zatężono do końcowej objętości 0,5 ml. Stężenia przeciwciała IgG w próbkach mieściły się w zakresie od 8,6 do 39,0 mg na mililitr. Aktywność proteazy w mieszaninie kontrolnej osocza i IgG od pacjentów wykreślono w funkcji aktywności proteazy w mieszaninie kontrolnego osocza i osocza, z którego wyizolowano przeciwciało IgG (Figura 3). Dodatnia korelacja (współczynnik korelacji, 0,91) wykazała, że hamująca aktywność próbek osocza od pacjentów z zakrzepową plamicą małopłytkową była zależna od IgG. Figura 4. Figura 4. Hamowanie aktywności proteazy rozszczepiającej czynnik von Willebranda przez przeciwciało IgG wyizolowane z osocza od pacjenta z zakrzepową plamką trombocytopeniczną (TTP) (panel A) i neutralizację aktywności hamującej przez przeciwciało przeciwko ludzkiemu regionowi Fab ( Panel B). W Tablicy A aktywność proteazy osocza kontrolnego i przeciwciała IgG wyizolowanego od pacjenta wykreślono względem ostatecznego stężenia IgG w mieszaninie (skala logarytmiczna). Pokazano także aktywność proteazową mieszaniny kontrolnego osocza i kontrolnej IgG. W panelu B aktywność proteazy mieszaniny kontrolnej osocza, przeciwciała IgG wyizolowanego od pacjenta i przeciwciał IgG względem regionu Fab (anty-Fab) lub regionu Fc (anty-Fc) wykreślono w stosunku do stosunku przeciwciał anty-Fc. Fab lub anty-Fc do IgG w mieszaninie (skala logarytmiczna).
Figura 4A przedstawia zależne od stężenia hamowanie aktywności proteazy przez przeciwciało IgG wyizolowane z jednej z tych próbek osocza. Przy stężeniu 2 mg na mililitr, przeciwciało IgG hamowało aktywność proteazy w osoczu kontrolnym o 50 procent. Kontrolne IgG nie wykazywały aktywności hamującej.
Aby potwierdzić, że zahamowanie wiąże się z interakcją antygen-przeciwciało, przed badaniem potraktowaliśmy IgG pacjenta króliczymi przeciwciałami IgG przeciwko ludzkiemu regionowi Fab IgG lub regionowi Fc (Figura 4B). Jedynie przeciwciało przeciwko regionowi Fab zniosło hamującą aktywność przeciwciała IgG pacjenta i było to prawdą we wszystkich testowanych sześciu testach IgG. W oddzielnych doświadczeniach przeciwciało królika przeciwko ludzkiemu łańcuchowi mu mu nie wpływało na hamującą aktywność przeciwciała IgG z osocza pacjenta.
Wpływ stresu ścinania na czynnik von Willebranda
Rycina 5. Ryc. 5. Wpływ stresu ścinania na proteolizę oczyszczonych multimerów czynnika von Willebranda. Oczyszczony czynnik von Willebranda rozpuszczono w kriosuperantzie kontrolnego osocza lub próbce osocza od pacjenta z zakrzepową plamicą małopłytkową (TTP). Panel A pokazuje rozmiary multimerów czynnika von Willebranda na elektroforezie w żelu agarozowym w kriosupernatantach w obecności i przy braku naprężenia ścinającego. Panel B pokazuje częstotliwość rozszczepionych fragmentów 350-kd i 200-kd w elektroforezie w żelu poliakryloamidowym i immunoblotting w obecności i przy braku naprężenia ścinającego. Naprężenie ścinające z szybkością 6404 na sekundę zmniejszyło wielkość multimerów i zwiększyło liczbę odłupanych fragmentów tylko w kontrolnym kriosupernacie
[hasła pokrewne: oprogramowanie stomatologiczne, bromazepam, dekstran ]
[patrz też: przetoka okołoodbytnicza, przetoka zębowa, przewlekła niewydolność żylna ]