Skip to content

Proteazy czynnika von Willebranda w trombotycznej trombocytopenicznej Purpurze i zespole hemolityczno-mocznicowym ad

4 tygodnie ago

497 words

Chorobę zaklasyfikowano jako rodzinną, jeśli dotknięto nią więcej niż jednego członka rodziny i jeśli spełniono co najmniej jedno z następujących kryteriów: każdy dotknięty członek rodziny miał wiele ostrych epizodów, ostre epizody wystąpiły w różnym czasie w przypadku rodzeństwa, a dotknięci członkowie rodziny mieszkali w różnych gospodarstwach domowych, gdy miały miejsce epizody. Dla każdego pacjenta wypełniono ankietę dotyczącą historii; oznaki i dane laboratoryjne dotyczące hemolizy wewnątrznaczyniowej; obecność fragmentacji erytrocytów, gorączki, objawów neurologicznych i dysfunkcji nerek; liczba ostrych zdarzeń; i ewentualne związane czynniki ryzyka, takie jak ciąża, rak, chemioterapia, przeszczep szpiku kostnego i zakażenie. Ponadto zebrano dostępne informacje na temat terapii i jej skuteczności. Zaburzenia scharakteryzowano jako nawracające, jeśli wystąpiły pełne remisje pomiędzy ostrymi atakami i jako przewlekłe, jeśli całkowite wyleczenie nie nastąpiło pomiędzy napadami. Rozpoznanie choroby jako zakrzepowej plamicy małopłytkowej lub zespołu hemolityczno-mocznicowego zostało wykonane przez badaczy w każdym uczestniczącym ośrodku bez wiedzy o wynikach testu proteazy rozszczepiającego czynnik von Willebranda. Badanie zostało zatwierdzone przez komisję etyczną Uniwersytetu w Bernie. Testy
Próbki krwi pobrano od pacjentów przed rozpoczęciem sesji wymiany plazmowej. Jednak niektórzy pacjenci, którzy byli badani podczas ostrego epizodu, otrzymywali terapię plazmową w dniach poprzedzających badanie. Próbki krwi poddano antykoagulacji z cytrynianem sodu lub heparyną. Osocze ubogie w płytki krwi przechowywano w temperaturze -20 ° C do czasu zbadania. Liczbę płytek krwi i pomiary hemoglobiny, dehydrogenazy mleczanowej, bilirubiny całkowitej i kreatyniny przeprowadzono zgodnie z konwencjonalnymi metodami laboratoryjnymi w każdym ośrodku. Antygen czynnika Von Willebranda mierzono za pomocą enzymatycznego testu immunoabsorpcyjnego za pomocą dostępnej komercyjnie króliczej surowicy odpornościowej przeciwko ludzkiemu czynnikowi von Willebranda (Nordic, Tilburg, Holandia).
Test aktywności proteazy rozszczepiającej czynnik von Willebranda przeprowadzono w sposób opisany uprzednio. Próbki osocza rozcieńczono 1:20 roztworem 0,15 mola chlorku sodu na litr i 10 mmolami TRIS na litr (pH 7,4) zawierającym mmol inhibitor proteazy serynowej na litr (Pefabloc SC, Boehringer, Mannheim, Niemcy). Proteaz aktywowano przez pięciominutową inkubację w 37 ° C z 10 mmolami chlorku baru na litr. Natychmiast po aktywacji 100 .l mieszaniny inkubacyjnej dodano do 50 .l wolnego od proteazy czynnika von Willebranda (przy stężeniu dostosowanym do około 3 U antygenu czynnika von Willebranda na mililitr), który oczyszczono przez filtrację żelową na Sepharose CL- Kolumny 2B (Pharmacia LKB, Uppsala, Szwecja) z krioprecypitatu prawidłowego ludzkiego osocza. Mieszaninę reakcyjną dializowano na powierzchni filtra hydrofilowego, który miał średnicę 25 mm (VSWP, Millipore, Bedford, MA) przez 24 godziny w 37 ° C wobec 1,5 mola mocznika na litr i 5 mmol TRIS-kwasu solnego. na litr (pH 8,0). Reakcję zatrzymano przez dodanie 10 .l EDTA (0,2 mol na litr, pH 7,4), a stopień degradacji czynnika von Willebranda oceniano za pomocą analizy multimerycznej za pomocą elektroforezy dodecylosiarczanu sodu na 1,4% żelach agarozowych.
[przypisy: ceftriakson, nutrend, Mimośród ]
[więcej w: przetoka okołoodbytnicza, przetoka zębowa, przewlekła niewydolność żylna ]