Skip to content

Mutacje w genie Connexin 26 (GJB2) wśród Żydów aszkenazyjskich z nieprzytomną recesywną głuchotą

1 miesiąc ago

521 words

Wrodzona głuchota występuje u około na 1000 żywych urodzeń, a 50 procent z tych przypadków jest dziedziczna1. Niegłoskowa, recesywna głuchota, określana jako brak słuchu bez innych powiązanych cech klinicznych, odpowiada za około 80 procent przypadków dziedzicznej głuchoty.1 istnienie co najmniej 20 genów, które w przypadku mutacji powodują, że głuchota recesywna nie została potwierdzona w badaniach genetycznych, chociaż większość tych genów nie została jeszcze zidentyfikowana.2 Badania populacyjne sugerują, że prawdopodobnie istnieje więcej takich osób.1, 3-8 Ostatnio wykazano, że mutacje w genie GJB2 należą do przyczyn tego stanu. 9,10 Gen GJB2 koduje białko z przerwą w złączu, connexin 26, które jest wyrażane w uchu wewnętrznym i jest uważane za ważne w utrzymaniu potencjału endocoulear. Kolejne badania wykazały, że pojedynczy zmutowany allel GJB2 odpowiada za większość przypadków nieprzytomnej recesywnej głuchoty wśród europejskiej populacji basenu Morza Śródziemnego.10-12 Ta mutacja jest określana jako 30delG (lub 35delG), ponieważ jest to delecja pojedynczego nukleotydu. w ciągu sześciu reszt guaniny, które rozpoczynają się w pozycji nukleotydowej 30 (i kończą w pozycji 35). Zidentyfikowaliśmy dwa zmutowane allele GJB2 w żydowskich rodzinach aszkenazyjskich z niesympatyczną recesywną głuchotą. Nasze odkrycia dotyczące zdolności słyszenia członków rodziny, którzy są heterozygotyczni dla jednego z tych zmutowanych alleli sugerują, że ekspresja mutacji w GJB2 może być semidominująca. Ustaliliśmy częstotliwości tych zmutowanych alleli GJB2 w reprezentatywnej populacji Żydów aszkenazyjskich.
Metody
Rodziny z nieprzytomną, recesywną głuchotą
Trzy rodziny uczestniczyły w badaniach genetycznych nad głuchotą recesywną nieprzytomną (protokoły 97-DC-0180 i 97-DC-N024 w Narodowym Instytucie Głuchoty i Innych Zaburzeń Komunikacyjnych). Osoby dotknięte chorobą wykazywały umiarkowaną do głębokiej wrodzoną utratę słuchu na wszystkich częstotliwościach, co oceniono na podstawie audiometrii tonalnej i testów na obecność ucha środkowego. Próbki DNA ekstrahowano albo z krwi pełnej za pomocą standardowych technik, albo z komórek uzyskanych przez zastosowanie wacika do błony śluzowej jamy ustnej.13
Wykrywanie mutacji i genotypowania
Gen GJB2 amplifikowano z próbek DNA od członków trzech uczestniczących rodzin za pomocą reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR) z parą primerów 167F (do przodu) i 452R (wsteczny) i parą primerów 370F (do przodu) i 889R (do tyłu), jak opisali Kelsell i wsp. [9] Liczby odnoszą się do nukleotydów na końcach 5 oligomerów i odpowiadają numerom pozycji nukleotydowych w sekwencji GJB2 zarejestrowanej w GenBank (numer dostępu, M86849). Te primery PCR wytwarzają zachodzące na siebie fragmenty, które obejmują cały region kodujący GJB2 i są wystarczająco małe (odpowiednio 285 i 519 par zasad), aby nadawały się do analiz polimorfizmu konformacji pojedynczej nici. Fragmenty PCR znakowano przez inkorporację [.33P] trifosforanu deoksycytydyny, denaturowano i rozdzielano przez elektroforezę w żelach zwiększających od 30 W do 0,5 x Mutation Detection Enhancement (MDE, FMC BioProducts, Rockland, Me.), 0,6 x TBE (1 x TBE). 89 mM TRIS zasada, 89 mM kwas borowy i 2 mM EDTA) i 10 procent glicerolu w 4 ° C przez cztery godziny
[patrz też: citalopram, przerzuty do kości, bupropion ]
[hasła pokrewne: polipektomia, porażenie piorunem, przerzuty do kości ]