Skip to content

lekarz diabetolog ełk

4 miesiące ago

574 words

Odkrycia te sugerują, że dysfunkcja prążkowia układu sygnałowego dopaminy odgrywa kluczową rolę w patofizjologii PNKD. Chociaż poziomy ekspresji receptorów adenozynowych i transporterów glutaminianu nie różnią się w prążkowiu myszy Pnkd, nie można wykluczyć możliwości zmiany wrażliwości receptorów adenozynowych i / lub uwalniania glutaminianu w terminalach glutaminergicznych. Dopamina ma kluczowe znaczenie dla indukcji dwukierunkowej plastyczności w synapsach glutaminergicznych na średnich neuronach kolczastych, zarówno w drodze bezpośredniej, jak i pośredniej, i ta równowaga jest przerywana w modelach choroby Parkinsona, które powodują jednokierunkowe zmiany plastyczności synaptycznej prążkowia (45). Synapsy glutaminergiczne na średnich neuronach spiny szlaku pośredniego wykazują wyższe prawdopodobieństwo uwalniania niż synaps glutaminergiczny na średnich neuronach spiny ścieżki bezpośredniej i selektywnie wyrażają długotrwałą depresję zależną od endokannabinoidów, która jest nieobecna w modelu choroby Parkinsona (46). ). Ponieważ prążkowy układ sygnalizacyjny dopaminy może być regulowany w górę, myszy Pnkd mogą również wykazywać zmiany plastyczności synaptycznej prążkowia pod wpływem stresu lub przy traktowaniu kofeiną / etanolem. Z kolei przejściowe zmiany aktywności neuronalnej w zwojach podstawy mogą wystąpić podczas ataków PNKD. Dalsze badania pozwolą lepiej zrozumieć rolę białka PNKD w regulacji komórkowej i synaptycznej oraz udział mutacji PNKD w patofizjologii. Taka praca może pozwolić na opracowanie lepszych terapii dla PNKD i potencjalnie dla innych zaburzeń epizodycznych. Ponieważ PNKD jest nowym genem uczestniczącym w modulowaniu uwalniania neurotransmiterów prążkowia, dalsze badania zarówno in vitro, jak i in vivo dadzą nowy wgląd w zrozumienie prawidłowej regulacji motorycznej zwojów podstawy mózgu i potencjalnie mogą mieć wpływ na zrozumienie innych dystonii i chorób prążkowia. Metody Zatwierdzenie badania. Wszystkie badania na zwierzętach zostały zatwierdzone przez Komitet ds. Opieki nad Zwierzętami i UCSF. Przeciwciała PNKD. Opracowano przeciwciała poliklonalne (Covance) przy użyciu 2 zsyntetyzowanych oligopeptydów odpowiadających N-końcu PNKD-L i -S oraz C-końca PNKD-L i -M. Krwinki premedialne i krwawienia testowe uzyskano indywidualnie od dostawcy w celu monitorowania miana przeciwciał i specyficzności w kolejnych krwawieniach. Przeciwciała oczyszczono metodą powinowactwa za pomocą standardowych procedur (patrz Metody dodatkowe). Oczyszczone pod względem powinowactwa przeciwciała stosowano następnie do eksperymentów Western blotting i immunohistochemicznych (N-końcowe przeciwciało, rozcieńczenie 1: 250 do 1: 500, C-końcowe przeciwciało, rozcieńczenie 1: 500 do 1: 1000). Generowanie myszy Pnkd-transgenicznych i -KO. Zarówno mut-Tg, jak i WT-Tg (jako kontrola dawkowania) zostały wygenerowane (szczegóły w Metodach uzupełniających). Liczbę kopii transgenu oszacowano metodą Southern blotting. Ogon DNA lub DNA kontrolny wzbogacony DNA BAC reprezentującym 1, 3, 5, 10 i 30 kopii / genom strawiono PstI, poddano elektroforezie na 0,8% agarozie i przeniesiono na membranę Hybond-N +. Bloty hybrydyzowano z losowo aktywowaną sondą znakowaną 32P-dCTP amplifikowaną z klonu BAC. Startery i warunki dla RT-PCR są szczegółowo opisane w Dodatkowych Metodach. Immunohistochemia w mózgu myszy i transfekowane komórki. WT i transgeniczne samce myszy uśmiercano i perfundowano; mózgi / rdzenie kręgowe usunięto, utrwalono, wzmocniono i zabezpieczono przed krioprądem, a 14-. m przekroje wieńcowe pocięto i zamontowano przy użyciu standardowych technik. Bloty sondowano przeciwciałem anty-PNKD C- lub N-końcowym i kolbowano mysimi przeciwciałami monoklonalnymi w celu wykrycia albo białka jądrowego swoistego dla neuronu (NeuN), kwaśnego białka włókienkowego glejowego (GFAP), podstawowego białka mieliny (MBP), dopaminy- oraz fosfoproteina neuronalna regulowana cAMP o masie cząsteczkowej 32 kDa (DARPP-32), acetylotransferaza choliny (ChAT), parwalbumina, dekarboksylaza kwasu glutaminowego 67 (GAD67) lub TH (patrz Metody dodatkowe)
[podobne: picie oleju lnianego, pluskwy ugryzienia, psychoterapia psychodynamiczna ]

0 thoughts on “lekarz diabetolog ełk”