Skip to content

laryngolog w dębicy

3 miesiące ago

213 words

Aby dalej rozszerzyć nasze obserwacje wzajemnego hamującego działania MPO i PON1 na każdą z drugiej aktywności. Z in vitro (ex vivo) do ustawienia in vivo, przeprowadzono dalsze badania z zastosowaniem myszy genetycznie zmodyfikowanych do braku (KO) lub nadekspresji ( Tg) albo MPO albo PON1. Wybraliśmy prosty i dobrze scharakteryzowany model ostrego zapalenia otrzewnej w tych badaniach, ponieważ wcześniej wykazaliśmy, że MPO służy jako główny katalizator enzymatyczny do utleniania białek i lipidów w modelu (31, 34). Aby zbadać wpływ PON1 na aktywność MPO, dokonano oceny ilościowej związanej z białkiem 3-chlorotyrozyny (ClTyr), specyficznego odcisku molekularnego dla utleniania białka katalizowanego MPO (29, 31), w białkach otrzewnowych odzyskanych z PON1 KO, WT i PON1 Myszy Tg po rekrutacji leukocytów do jamy otrzewnowej za pomocą tioglikolanu, a następnie aktywacji przez wstrzyknięcie ip składników węglowodanowych białka ściany drożdży (zymosan). W porównaniu z WT, myszy PON1 KO wykazały znaczący (P = 0,02) wzrost zawartości ClTyr związanego z białkiem o około 50% w odzyskanych białkach płynu z płukania otrzewnej (Figura 2A). Zależny od dawki efekt zwiększenia PON1 prowadzący do obniżonej aktywności MPO, monitorowanej przez tworzenie ClTyr, był dalej wspierany przez wykazanie około 50% redukcji (P <0,01) zawartości ClTyr w białku z płukania otrzewnej u myszy PON1 Tg względem WT. kontrole (ryc. 2A). Tak więc, PON1 wykazuje zależny od dawki efekt hamujący na wytwarzanie specyficznego dla MPO produktu utleniania, ClTyr, w modelu ostrego zapalenia. Figura 2MPO i PON1 hamują aktywność każdego z osobna in vivo. (A) zwierzętom PON1 KO, WT lub PON1 Tg wstrzyknięto ip zwykłym bulionem solankowym (Bl) lub bulionem tioglikolanowym (T). Dwadzieścia cztery godziny później przeprowadzono płukanie otrzewnej. Tam, gdzie to wskazano, myszom wstrzyknięto zymosan (Z) 24 godziny po tioglikolancie i płukanie otrzewnej przeprowadzono 4 godziny później. Zawartość chlorotyrozyny (ClTyr) (znormalizowanej do prekursorowej aminokwasu tyrozyny [Tyr]) w rozpuszczalnych białkach odzyskanych z płukania otrzewnej określono przez analizę LC / MS / MS stabilnego izotopowo rozcieńczenia. (B) zwierzętom z MPO KO, WT lub MPO Tg wstrzyknięto ip z normalną solą fizjologiczną lub zymosanem (Z). Po 72 godzinach podostrego zapalenia otrzewnej wyizolowano surowicę i mierzono aktywność paraoksonaz. W równoległym zbiorze badań określiliśmy wpływ zmian genetycznych w poziomach MPO na ogólnoustrojową aktywność PON1 zmierzoną podczas stanu zapalnego. W tym przypadku mierzono aktywność paraoksonazy w surowicy w podostrym modelu otrzewnej po wstrzyknięciu ip-zymosanu. U myszy WT, przewlekły stan zapalny (72 godziny) indukowany przez ip zymosan spowodował znaczące (P <0,05) 30% zmniejszenie aktywności paraoksonazy w surowicy (Figura 2B). Zapoczątkowanie zapalenia otrzewnej u ludzkiej myszy MPO Tg ujawniło jeszcze bardziej wyraźne hamowanie w ogólnoustrojowej aktywności paraoksonaz (55%, P <0,001), podczas gdy indukcja zapalenia otrzewnej w porównywalnych warunkach u myszy MPO KO nie zmieniła ogólnoustrojowych poziomów aktywności PON1 ( Figura 2B). Co ważne, badanie krążących stężeń PON1 wykazuje podobne poziomy między myszami MPO KO i MPO Tg (dodatkowa Figura 3). Zatem zmiany obserwowane w aktywności PON1 w surowicy są zgodne z hamowaniem aktywności katalitycznej (aktywności właściwej) białka w procesie zależnym od MPO. Spektrometria masowa z wymianą deuteru wodoru i badania mutagenezy ujawniły miejsca oddziaływań funkcjonalnych na APOA1 HDL i PON1. Następnie staraliśmy się zidentyfikować miejsca kontaktu między PON1 i APOA1 rekonstytuowanego powstającego HDL (nHDL). Spektrometria masowa z wymianą wodoru i deuteru (HDX) jest potężnym narzędziem do identyfikacji miejsc oddziaływania białko-białko i została wykorzystana do identyfikacji miejsca wiązania MPO na APOA1 nHDL (23) [hasła pokrewne: pokrzywka objawy, olx szczecin, pluskwy ugryzienia ]

0 thoughts on “laryngolog w dębicy”

  1. [..] odnosnik do informacji w naukowej publikacji odnosnie: tabletki przeciwstarzeniu[…]