Skip to content

internista bielany

2 miesiące ago

568 words

Próbki osocza na czczo otrzymano od 5 305 osób w kohorcie sercowo-naczyniowej MDC, z których 564 miało przewagę cukrzycy lub choroby sercowo-naczyniowej przed linią podstawową. Warto zauważyć, że 456 pacjentów nie miało danych współzmiennych, pozostawiając 4285 osób kwalifikujących się do analizy. Szczegółowe opisy oceny klinicznej, definicji cukrzycy i wyboru pacjentów zostały wcześniej opisane (8). Profilowanie metaboliczne Zastosowaliśmy metodologię podobną do naszej zgłoszonej techniki profilowania polarnych metabolitów osocza za pomocą oddziaływań hydrofilowych LC (HILIC) i LC-MS (8), chociaż dla tej analizy skupiliśmy się na małych cząsteczkach preferencyjnie zjonizowanych przy użyciu ujemnego jonizacji przez elektrorozpylanie w warunkach podstawowych . Dane pozyskiwano stosując ACQUITY UPLC (Waters) sprzężony z potrójnym kwadrupolowym spektrometrem masowym 5500 QTRAP (AB SCIEX). Aby opracować tę metodę, określiliśmy czasy retencji chromatograficznej i ustawienia monitorowania wielu reakcji (MRM) dla ponad 150 związków odniesienia, z których 70 można było wykryć w ludzkim osoczu w zarchiwizowanych próbkach FHS. Spośród 70 metabolitów 41 było wykrywalnych w ponad 99% próbek ludzkich. Próbki przygotowano przez dodanie 120 .l roztworu ekstrakcyjnego (80% metanolu [VWR] plus wewnętrzne standardy inozyna-15N4, tymina-d4 i glikocholan-d4, Cambridge Isotope Laboratories) do 30 .l plazmy. Próbki odwirowano (10 minut, 9000 g, 4 ° C), a supernatanty wstrzyknięto bezpośrednio na kolumnę Luna NH2 o wymiarach 150 x 2,0 mm (Phenomenex), którą eluowano przy prędkości przepływu 400 l / min w warunkach początkowych. 10% fazy ruchomej A (20 mM octan amonu i 20 mM wodorotlenek amonu [Sigma-Aldrich] w wodzie [VWR]) i 90% faza ruchoma B (10 mM wodorotlenek amonu w 75:25 obj./obj. acetonitryl / metanol [VWR] ]), a następnie 10-minutowy gradient liniowy do 100% fazy ruchomej A. Napięcie w rozpyleniu jonowym wynosiło ~ 4,5 kV, a temperatura źródła wynosiła 500 ° C. Surowe dane przetwarzano przy użyciu MultiQuant 1.2 (AB SCIEX). Dane znormalizowano względem połączonych próbek odniesienia osocza, które analizowano w kolejce próbki po zestawach 20 próbek badawczych. Przeprowadziliśmy dodatkowe badania ze związkiem referencyjnym znakowanym izotopem dla 2-AAA (d3; C / D / N Isotopes Inc.), zidentyfikowano nowy biomarker. Wykazaliśmy, że obszary pików były większe niż 2 rzędy wielkości powyżej dolnej granicy oznaczalności (zdefiniowanej jako dyskretny pik 10-krotnie większy niż hałas) i spadały dobrze w liniowym zakresie zależności dawka-odpowiedź (podano dane reprezentatywne na dodatkowej ilustracji 4). Ustaliliśmy medianę dla 2-AAA w populacji kontrolnej FHS, wykorzystując te dane. Żadne wyniki ilościowe w innych populacjach ludzkich nie są dostępne dla porównania. Badania na zwierzętach Samce myszy C57BL / 6 (Jackson Laboratories) trzymano w oddzielnych klatkach z wolnym dostępem do pożywienia i wody. Myszy karmiono SCD zawierającym 22,5% białka, 52% węglowodanów, 6% tłuszczu, 6% popiołu i 4% błonnika (Prolab Isopro RMH 3000) lub HFD zawierającego 20 kcal% białka, 20 kcal% węglowodanów i 60 kcal% tłuszczu. (Wzór DIO, D12492, Research Diets Inc.) jak wskazano. Całkowity ekwiwalent energii wynosił 3,46 kcal / g dla SCD i 5,24 kcal / gm dla HFD. W badaniach oceniających rolę 2-AAA w homeostazie glukozy, 4 niezależne kohorty 24 myszy weszły do protokołu badania. Dwie kohorty otrzymały SCD, a dwie kohorty otrzymały HFD. Połowa myszy przypisanych do każdej diety otrzymywała 2-AAA (500 mg / kg / d równoważną początkowej dawce 12,03 . 0,30 mM) przez wodę pitną przez okres do 5 tygodni. Do każdej klatki podawano uprzednio odważone jedzenie i wodę. Pobór jedzenia i wody był monitorowany co tydzień. Poziomy insuliny na czczo u myszy mierzono za pomocą zestawu ELISA (Crystal Chem Inc.)
[więcej w: olx czechowice, picie oleju lnianego, olx augustow ]

0 thoughts on “internista bielany”