Skip to content

danuta bobrowska alergolog zielona góra

3 tygodnie ago

287 words

Dlatego użyliśmy HDX do przesłuchania potencjalnej strony (ów) na APOA1 w obrębie nHDL zaangażowanych w interakcje PON1. Badanie czynników wbudowywania deuteru protonu amidu w peptydy peptydowe wytworzone z APOA1 nHDL pod nieobecność lub obecność PON1 wykazało 2 regiony łańcucha polipeptydowego APOA1 ze znaczącym (> 10%) zmniejszeniem współczynnika włączenia deuteru w obecności PON1. Wiele zachodzących na siebie peptydów peptydowych pomogło zdefiniować regiony wykazujące redukcję wymiany deuteru w obecności PON1, Leu38-Leu46 (określanego jako P1, umiejscowionego na granicy pomiędzy N-końcem APOA1 i helisą 1) i Thr202-Arg215 (zwany P2, znajduje się na granicy między helisą 8 [7 reszty] a spiralą 9 [7 reszt]) (rys. 3, A i B). Badanie lokalizacji tych regionów na ostatnio zaproponowanym modelu podwójnej superheliksu nHDL, opracowanym przy użyciu kombinacji kontrastowych zmian, rozpraszania neutronów o małych kątach, HDX i chemicznego sieciowania / spektrometrii masowej (37) wykazało, że P1 i P2 są przewiduje się, że będą przebywać bezpośrednio naprzeciwko siebie na 2 antyrównoległych łańcuchach APOA1 (Figura 3C). Ponadto znajdują się w bliskim sąsiedztwie miejsca interakcji wcześniej zidentyfikowanego między MPO i APOA1 w nHDL (reszty APOA1 190. 203) (23). Należy zauważyć, że zidentyfikowane regiony peptydu PI i P2 APOA1 znajdują się bezpośrednio naprzeciwko lub sąsiadują ze sobą w antyrównoległych łańcuchach APOA1 w każdym zgłoszonym modelu HDL dostępnym jako plik banku białek (PDB) (37. 45). Figura 3 Miejsca interakcji PON1 na APOA1 w obrębie nHDL ujawnione przez HDX MS. (A) Wykres wskazujący procent włączenia deuteru do wymiennych protonów w obrębie poszczególnych peptydów peptydowych APOA1 w nHDL pod nieobecność (czarne słupki) względem obecności (białe słupki) PON1. ** P <0,05. (B) Wykres przedstawiający procentową zmianę inkorporacji deuteru poszczególnych peptydów peptydowych APOA1 w nHDL pod nieobecność lub obecność PON1. Dwa regiony APOA1 wykazują znaczne zmniejszenie inkorporacji deuteru w obecności lub nieobecności PON1 / P1 (L38GKQLNLKL46) i P2 (S201TLSEKAK208). Linia przerywana oznacza 10% zmniejszenie inkorporacji deuteru. (C) Ilustracja domen interakcji PON1 P1 i P2 na APOA1 w podwójnym modelu superheliksu nHDL. Dwie cząsteczki APOA1 są ustawione w układzie przeciwległy-od głowy do ogona przy użyciu rejestru helisy 5 / helisa 5. N-końcowe są wyświetlane w kolorze ciemnoczerwonym / niebieskim, a końce C w jasnym czerwonym / niebieskim kolorze. Miejsca oddziaływania PON1 na nHDL (P1, niebieski, P2, jasnoczerwony). W celu zbadania funkcjonalnej istotności sekwencji APOA1 zidentyfikowanych jako potencjalne miejsca kontaktu między nHDL i PON1, wygenerowano ukierunkowane na miejsce zmutowane formy APOA1, przy czym zmieniono sekwencje WT w obrębie P1 (L38GKQLNLKL46) i P2 (S201TLSEKAK208), usuwając potencjalne wiązanie wodorowe. i miejsca oddziaływania jonowego (P1mut = L38GEALALEL46 i P2mut = S201ALAAEAE208) (Figura 3B). Wstępne badania kontrolne z zastosowaniem rekombinowanych zmutowanych form APOA1 wytworzonych z sekwencjami P1mut lub P2mut ujawniły, że oba były funkcjonalnie czynne i nieodróżnialne od ludzkiego APOA1 w odniesieniu do ogólnej struktury monitorowanej przez dichroizm kołowy (Suplementowa Figura 4A) i zależna od ABCA1 aktywność wypływowa z cholesterolu - załadowane komórki RAW (dodatkowa Figura 5A). Podobnie, nHDL wytworzone przy użyciu rekombinowanego ludzkiego APOA1 (WT) w porównaniu z postaciami APOA1 zawierającymi P1mut lub P2mut wykazywały podobną ogólną strukturę (Suplementowa Figura 4B) i porównywalną aktywność całkowitego wypływu cholesterolu z komórkami RAW obciążonymi cholesterolem (Suplementowa Figura 5B). Powierzchniowa spektroskopia rezonansu plazmonowego została również przeprowadzona w celu oceny zmian w oddziaływaniu wiązania między PON1 i nHDL wytworzonych przy użyciu rekombinowanego ludzkiego APOA1 (WT) w porównaniu ze zmutowanymi formami APOA1 zawierającymi P1mut lub P2mut [podobne: osa a pszczoła, penire plus opinie, pszeniczny brzuch ]

0 thoughts on “danuta bobrowska alergolog zielona góra”