Skip to content

chrzanowska krystyna

2 miesiące ago

172 words

Aby ocenić, czy wyższa stopa wzrostu Cbx7. /. MEF zostały spowodowane przez obłąkane postępy w fazach cyklu komórkowego, przebadaliśmy asynchronicznie rosnące MEF za pomocą cytometrii przepływowej. Liczba Cbx7. /. MEF były niższe w G1 i wyższe w fazie S cyklu komórkowego w porównaniu z Cbx7 + / + MEF (Figura 2B). Konsekwentnie, Cbx7. /. MEF przejściowo transfekowane wektorem ekspresyjnym Cbx7 znakowanym Myc-Hys . wykazały zmniejszoną liczbę komórek w fazie S i zwiększoną populację komórek w fazie G1 cyklu komórkowego w porównaniu z transfekowanym Cbx7a /. MEF (rysunek 2C). Figura 2 Silne zmiany w MEF Cbx7-KO. (A) MEF wytworzono z Cbx7 + / +, Cbx7 + / a i Cbx7a / r. zarodki o 12,5 dpc. W korytarzu 4 hodowli posiewano je i policzono codziennie przez 13 dni w celu ekstrapolacji krzywych wzrostu. Pokazane są wredne. SEM z 3 różnych klonów komórek (każdy pochodzący z innego zarodka) dla każdego genotypu. (B i C) Cytometria przepływowa jodkiem Propidium asynchronicznego wzrostu WF i Cbx7-KO MEF. (B) Procent komórek w każdej fazie cyklu komórkowego (średnia . SEM). * P <0,05. (C) Analiza FACS dla Cbx7a /. MEF-y przejściowo transfekowane różnymi ilościami wektora ekspresyjnego Cbx7 lub wektora szkieletowego (BV). (D. I) Mikroskopia świetlna reprezentatywnych Cbx7 + / + (D i G), Cbx7 + /. (E i H) i Cbx7. /. (F i I) Klony MEF barwione na aktywność (3-galaktozydazy w pasażach kultury 4 (P4; D. F) i 7 (G. I). (J) Ekspresję inhibitorów cyklu komórkowego Cdkn2a, tp53 i Cdkn1a w reprezentatywnych MEF z każdego genotypu określono za pomocą qRT-PCR w pasażach kultury 4 i 7. * P <0,05. Przejście 4 Cbx7. /. Pokazano także MEF przejściowo transfekowane wektorem szkieletowym (C) lub którego ekspresja Cbx7 została przywrócona (R). (K) Ekspresję regulatorów cyklu komórkowego i starzenia w reprezentatywnych MEF z każdego genotypu określono metodą Western blot w pasażu kultury 7. Znormalizowane poziomy białka, ocenione przez analizę densytometryczną, wskazano powyżej immunoblotów. Następnie zbadaliśmy podatność na starzenie się MEFs w różnych pasażach kultury, mierząc zależną od starzenia aktywność a-gal (SA. - gal). Zaczynając od pasażowego pasa 7 hodowli, aktywność SA. - gal była obecna w WF MEF, o czym świadczy obecność zielonych komórek (Figura 2G). Odwrotnie, aktywność SA. - gal była nieobecna w większości odpowiedników Cbx7-KO (Figura 2, H i I). Te odkrycia sugerują rolę CBX7 w indukcji starzenia komórkowego. Senne czynniki MEF wyrażają podwyższone poziomy p21 i p16 w następstwie replikacji i stresu kulturowego (15). Te 2 geny mogą współdziałać w celu hamowania fosforylacji Rb i utrzymywania zatrzymania wzrostu w nieodwracalnym stanie. Dlatego oceniliśmy poziomy mRNA i białka p16, p53 i p21 w MEF WT i Cbx7-KO za pomocą ilościowego RT-PCR (qRT-PCR) i analizy Western blot. Poziomy ekspresji mRNA i białka p16 (począwszy od pasażu 4) oraz p53 i p21 (w pasażu 7) były istotnie niższe w Cbx7-KO niż w WFF MEF (Figura 2K). Konsekwentnie, poziomy p53 fosforylowanego S15 były równoległe do p21, a zarówno cyklina A, jak i cyklina E były regulowane w górę w Cbx7a / p. versus Cbx7 + / + MEF (rysunek 2K). Co więcej, Cbx7. /. MEFs, w których przywrócono ekspresję Cbx7. ale nie te transfektowane pustym wektorem. wykazywały poziomy transkryptu Cdkn2a i trp53 porównywalne z obserwowanymi w WFF WF i znacząco zwiększały poziomy Cdkn1a w porównaniu z WT (Figura 2J). Co ciekawe, MEF izolowane z 2 transgenicznych linii myszy nadeksprymujących Cbx7 pod kontrolą transkrypcyjną promotora cytomegalowirusa (Suplementowa Figura 2A) wykazywały zachowanie przeciwne do zachowania CGx7-KO MEF: niższy wskaźnik proliferacji (Suplementowa Figura 2B), który był zależny od dawki Cbx7 , przy zmniejszonej populacji komórek w fazie S cyklu komórkowego (dane nie pokazane) [podobne: penire plus opinie, przetoka zębowa, olx szczecin ]

0 thoughts on “chrzanowska krystyna”

  1. [..] Blog oznaczyl uzycie nastepujacego fragmentu prywatne ubezpieczenie zdrowotne[…]