Skip to content

apteka dbam o zdrowie nysa

4 miesiące ago

499 words

Konsekwentnie, zmniejszoną ekspresję Ccne1, Ccna2 i Ccnb1 obserwowano w MEF obu transgenicznych linii myszy w porównaniu z WFF MEF (Suplementowa Figura 2A). CBX7 wiąże się i negatywnie reguluje promotor CCNE1. Próbując zrozumieć mechanizm, dzięki któremu CBX7 negatywnie reguluje przejście G1 / S, skupiliśmy się na genie CCNE1 z różnych powodów: (a) jest to kluczowe dla przejścia G1 / S podczas cyklu komórkowego ssaków (16); (b) jego promotor zawiera skrzynkę E, która jest również obecna w regionie rozpoznawanym przez CBX7 na promotorze CDH1 (12); (c) jest pozytywnie regulowany przez E2F3, którego aktywność jest modulowana ujemnie przez białka regulujące chromatynę i -modelujące białka, w tym białka HDAC i PcG (17, 18); i (d) jego nadekspresja jest często związana z rakiem płuc (19), najczęstszym typem nowotworu u myszy Cbx7-KO (patrz poniżej). Dlatego zapytaliśmy, czy CBX7 może ujemnie regulować ekspresję CCNE1 i w konsekwencji modulować proliferację komórek, tym samym odpowiadając za wzrost szybkości komórek fibroblastów Cbx7-KO. Najpierw mierzyliśmy ekspresję Ccne1 w MEF i tkankach (nerkach i płucach) Cbx7 + / +, Cbx7 + / a i Cbx7a /. myszy za pomocą qRT-PCR. Jak pokazano na Fig. 3A, poziomy ekspresji Ccne1 były wyższe w MEF i tkankach Cbx7-KO niż w kontrolach WT. Analiza Western blot dała te same wyniki (Figura 2K i dane nie pokazane). Co interesujące, przywrócenie ekspresji Cbx7 spowodowało obniżenie poziomów ekspresji Ccne1 w Cbx7a / r. MEF, porównywalne z obserwowanymi w WF MEF (rysunek 3A). Co więcej, ekspresja Ccne1 była zmniejszona w MEF pochodzących od myszy z nadekspresją Cbx7 w sposób zależny od poziomu Cbx7 (Suplementowa Figura 2A). Razem wyniki te potwierdzają hipotezę, że CBX7 negatywnie reguluje CCNE1. Figura 3-zależna regulacja ekspresji Ccne1. (A) qRT-PCR na MEF i tkankach myszy WT i Cbx7-KO, w tym Cbx7a /. MEF-y przejściowo transfekowane wektorem szkieletowym (Cbx7a / yC) lub których ekspresja Cbx7 została przywrócona (Cbx7a / rR), w celu wykrycia ekspresji Ccne1. (B) EMSA przeprowadzony z wyznakowanym radioaktywnie oligonukleotydem promotora CCNE1 inkubowanym z 5 i 20 ng rekombinowanego GST-CBX7 (ścieżki 2 i 3), GST-CBX7-CHROMO (ścieżki 5 i 6) lub GST-CBX7-NOCHROMO (ścieżki 8 i 9) białek. Gdy wskazano, dodano 400-krotny molowy nadmiar nieznakowanego oligonukleotydu promotora CCNE1 (ścieżki 4, 7 i 10). Dalsze negatywne kontrole uzyskano przez inkubację rekombinowanych białek ze znakowanym radioaktywnie oligonukleotydem promotora GAPDH (ścieżki 11 i 12). (C. E) Wyniki testów ChIP. Promotory CDKN2A i CDH1 zastosowano jako kontrole pozytywne, podczas gdy promotor GAPDH i nieswoiste IgG zamiast anty-CBX7 zastosowano jako kontrole negatywne. (C) Test ChIP na komórkach HEK 293 transfekowanych eksprymującym CBX7 lub pustym wektorem do wiązania CBX7 z promotorem CCNE1. (D) Test ChIP na MEF do wiązania endogennego Cbx7 z promotorem Ccne1. (E) Test ChIP na MEF do wiązania endogennego Cbx7 i Hdac2 do promotora Ccne1. (F) aktywowana przez promotor CCNE1 aktywność lucyferazy, w odniesieniu do aktywacji pustych komórek transfekowanych wektorem wektora, w komórkach HEK 293. Gdzie wskazano, i 2 .g CBX7 kotransfekowano z plazmidem cykliny E (3uc. * P <0,05; ** P <0,01. Następnie ocenialiśmy wiązanie białka CBX7 z promotorem CCNE1 in vitro za pomocą EMSA z oligonukleotydem obejmującym od około 51 do około 12 pz powyżej wyjściowego miejsca transkrypcji (TSS) ludzkiego regionu promotora CCNE1, w tym element reagujący na E2F i Odpowiedni do HMGA elastyczny odcinek AT. Zwiększenie ilości (5 i 20 ng) rekombinowanego białka S-transferazy glutationu-CBX7 (GST-CBX7) związanego z dwuniciowym oligonukleotydem znakowanym końcem 32P w sposób zależny od dawki (Figura 3B, ścieżki 2 i 3) ) [podobne: pecherzyca, przetoka okołoodbytnicza, olx augustow ]

0 thoughts on “apteka dbam o zdrowie nysa”